湖南長軻科技發(fā)展有限公司
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在pcr實驗室的管理中應盡量避免污染產(chǎn)生,如果不慎產(chǎn)生了污染也有對應的處理方法,接下來長沙實驗室設計公司的小編針對這一情況,如下給大家總結(jié)了關于pcr實驗室污染的處理方法以及pcr實驗室操作需要注意的事項的總結(jié)。

解決PCR實驗室檢測被污染的方法
1、修飾:標記遺傳物質(zhì),阻止聚合酶與核酸的結(jié)合,從而抑制DNA擴散(效果相對較好)。
2、酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證污染表面污染得到一定程度的緩解(簡單、方便、成本低)。
3、紫外照射:PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會形成二聚體,延伸終止(方便、范圍廣、成本低)。
4、酶解酶可將長鏈的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相對相對較好)。
5、高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段(徹底、成本低)。
PCR實驗操作注意事項
盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應該注意:
1、盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
2、避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
3、戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
4、最后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
5、使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
6、操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的精確度;
7、操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;
8、重復實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。
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